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                    大鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒使用說明書

                    發(fā)布時間: 2010-10-09  點擊次數(shù): 1282次

                    本試劑盒僅供研究使用。
                    藥品名稱:
                    通用名:大鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
                    使用目的:
                    本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)含量。
                    實驗原理
                    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)水平。用純化的大鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腸脂肪酸結合蛋白(iFABP),再與HRP標記的腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)濃度。
                    試劑盒組成

                    1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
                    2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(1350ng/L) 0.5ml×1瓶
                    3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
                    4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
                    5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
                    6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個


                    標本要求
                    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
                    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
                    操作步驟
                    1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為900ng/L,600ng/L ,300ng/L, 150ng/L,75ng/L)。
                    2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
                    3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
                    4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
                    5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
                    6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
                    7.         溫育:操作同3。
                    8.         洗滌:操作同5。
                    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
                    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
                    11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
                     
                    計算
                      以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
                    注意事項
                    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
                    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
                    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
                    4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
                    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
                    6.底物請避光保存。
                    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
                    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
                    9.本試劑不同批號組分不得混用。
                    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
                    檢測范圍:
                    50ng/L -1000ng/L
                    規(guī)格:
                    96人份/盒
                    保存條件及有效期
                    1.試劑盒保存:;2-8℃。
                    2.有效期:6個月
                    ELISA試劑盒

                  產品中心 Products
                  在線客服 聯(lián)系方式

                  服務熱線

                  021-54479081
                  021-54461587

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